Рекомбинантный аллерген

Содержание

ФС.3.3.1.0001.15 Аллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении

Рекомбинантный аллерген

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Аллерген туберкулезный                               ФС.3.3.1.0001.15

рекомбинантный в                                                Взамен ГФ Х, ст. 706,

стандартном разведении                                ФС 42-19ВС-86

Настоящая фармакопейная статья распространяется на аллерген туберкулезный рекомбинантный, который представляет собой гибридный белок с молекулярной массой около 27 кДа, состоящий из 2 антигенов CFP10-ESAT6, продуцируемый генетически модифицированной культурой Еscherichia соli BL21(DE3)/pCFP-ESAT.

Аллерген туберкулезный рекомбинантный предназначен для диагностики туберкулеза.

ПРОИЗВОДСТВО

Производство препарата аллергена туберкулезного рекомбинантного должно осуществляться с соблюдением установленных правил организации производства и контроля качества генно-инженерных иммунобиологических лекарственных средств, гарантирующих качество и безопасность для человека.

Выращенную культуру клеток бактерий-продуцентов отделяют от среды и лизируют для высвобождения белка. Лизат клеток-продуцентов проходит стадии хроматографического выделения и очистки целевого белка-концентрата.

Очищенный концентрат – полуфабрикат (субстанция) аллергена туберкулезного подлежит проверке на стерильность, отсутствие сенсибилизирующих свойств, содержание белка, специфичность, специфическую активность, аномальную токсичность.

Стандартное разведение аллергена получают путем разведения концентрата изотоническим фосфатным буферным раствором до содержания 0,2 мкг гибридного белка в 0,1 мл.

Описание

Бесцветная прозрачная жидкость без посторонних примесей.

Подлинность

Препарат при внутрикожном введении морским свинкам, зараженным тест-штаммом Mycobacterium tuberculosis, должен вызывать положительные кожные реакции, а у животных, иммунизированных вакциной БЦЖ, реакции должны отсутствовать (разделы «Специфическая активность», «Специфичность»).

Прозрачность

Должен быть прозрачным. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность

Должен быть бесцветным. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей».

Извлекаемый объем

Не менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».

рН

От 7,35 до 7,55. Определяют потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия»» href=»http://pharmacopoeia.ru/ofs-1-2-1-0004-15-ionometriya/»>ОФС «Ионометрия».

Аномальная токсичность

Должен быть нетоксичным. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность»» href=»http://pharmacopoeia.ru/ofs-1-2-4-0004-15-anomalnaya-toksichnost/»>ОФС «Аномальная токсичность» на 5 мышах, тест-доза 0,5 мл.

Бактериальные эндотоксины

Не более 5 ЕЭ/мл. Определение проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины».

Стерильность

Должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность»» href=»http://pharmacopoeia.ru/ofs-1-2-4-0003-15-sterilnost/»>ОФС «Стерильность» методом прямого посева или мембранной фильтрации.

Специфическая активность

В 0,1 мл препарата должно содержаться 0,2 мкг аллергена туберкулезного рекомбинантного. Индекс специфической активности должен быть равен (1,00 ± 0,05). Испытание проводят на морских свинках, зараженных живой культурой Mycobacterium tuberculosis.

Морских свинок (альбиносов или белокожих Hartley) массой (350±50) г содержат на постоянном пищевом рационе и в одинаковых условиях окружающей среды. Сенсибилизацию проводят путем заражения животных подкожно или аэрогенно вирулентным штаммом M. tuberculosis.

Используют третью генерацию тест-штамма с плотной среды для выращивания микобактерий. Морских свинок используют для постановки проб не более 2 раз в период от 30 до 120 сут после инфицирования с интервалом между постановками проб не менее 30 сут.

При повторном использовании животных пробы ставят на участках кожи, ранее не подвергавшихся воздействию препаратов.

За 24 ч до постановки туберкулиновых проб шерсть на спине или боках морских свинок удаляют сплошной полосой шириной 3-4 см.

Испытание препарата проводят на 6 зараженных микобактериями туберкулеза морских свинках. Заполняют 4 шприца испытуемым образцом и 4 шприца разведенным (0,2 мкг/0,1 мл) стандартным образцом (СО) аллергена туберкулезного рекомбинантного.

Каждой морской свинке по методу случайных чисел вводят по 0,1 мл внутрикожно 4 пробы испытуемого образца и 4 пробы СО. Реакцию учитывают через 24 ч, измеряя 2 взаимно перпендикулярных диаметра эритемы в мм. Подсчитывают суммы реакций на испытуемый препарат и на СО.

Специфическую активность оценивают по индексу специфической активности (I) – отношению суммы реакций на испытуемый препарат к сумме реакций на разведенный СО при отсутствии достоверных различий между средними реакциями на испытуемый препарат и СО.

Если полученные результаты выходят за указанные пределы, испытание повторяют. Результаты 2 испытаний усредняют.

Специфичность

Морские свинки, иммунизированные вакциной БЦЖ, не должны реагировать на внутрикожное введение 0,2 мкг в 0,1 мл испытуемого аллергена туберкулезного рекомбинантного и давать положительные реакции – папулы диаметром не менее 5 мм на 2 ТЕ в 0,1 мл СО очищенного туберкулина. Испытание проводят на 3 морских свинках не ранее чем через 30 дней после введения им по 0,5 мг вакцины БЦЖ.

Фенол

От 0,20 до 0,30 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Количественное определение фенола спектрофотометрическим методом в иммунобиологических лекарственных препаратах».

Производственные штаммы

Рекомбинантный штамм Escherichia coli BL21(DE3)/pCFP-ESAT — прототрофный штамм E.

coli В (депонирован в ИБХ РАН), который обладает рядом характеристик, отличающих его от штамма предшественника: быстрый рост на минимальной среде, способность к синхронизации, устойчивый рост культуры в условиях биосинтеза белка и недостатка питательных веществ, дефектность системы рестрикции ДНК В-типа.

Штамм несет оригинальную плазмиду pCFP10-ESAT6, содержащую генетическую конструкцию из 2 генов M. tuberculosis – cfp10 и esat 6 и ген устойчивости к ампициллину (bla). Штамм устойчив к ампициллину (100 – 150 мкг/мл) и чувствителен к остальным антибиотикам.

Для контроля качества препарата используют тест-штаммы M.tuberculosis (вирулентный) и M. bovis BCG — 1 из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов.

Упаковка и маркировка

В соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».

Транспортирование

При температуре от 2 до 8 оС в условиях, исключающих замораживание. Допускается транспортирование при температуре не выше 18 °С в течение 15 дней.

Хранение

При температуре от 2 до 8 °С. Не замораживать!

Скачать в PDF ФС.3.3.1.0001.15 Аллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении

Источник: https://pharmacopoeia.ru/fs-3-3-1-0001-15-allergen-tuberkuleznyj-rekombinantnyj-v-standartnom-razvedenii/

Возможные реакции организма на аллергены

Рекомбинантный аллерген

Поживем — увидим,Доживем — узнаем,

Выживем — учтем.

Сегодня хочу поделиться с вами информацией, которая поможет немного разобраться в результатах анализа аллергочипа. В статье рассмотрим белки аллергены (компоненты), отображенные в аллергочипе, отвечающие за различные проявления аллергических реакций, от зуда во рту до анафилаксии: арахис, соя, пшеница, орехи, фрукты, шерсть животных, плесень и др.

Также познакомимся с белками, которые чаще всего вызывают у аллергиков астму. И пробежимся немного по перекрестной способности белков.

Больше информации о свойствах белков и перекрестной реакции на них, можно почерпнуть из других моих статей, посвященных молекулярной диагностике:
Расшифровываем аллергочип
Белки в растениях, вызывающие пищевой перекрест (ссылка)
Белки и их значения (ссылка)

Аллергочип — это  воистину кладезь полезной информации. Для тех, кто еще не знает, что такое аллергочип, вот ссылка на статью. 

С помощью аллергочипа, понимая на какие именно белки организм выдает аллергическою реакцию, можно предугадать насколько она может быть тяжелой. Выдаст ли организм отек или обойдется все лишь неприятными ощущениями во рту.  И это очень важная информация, потому что в аллергии больше всего пугает именно анафилаксия.

Белки делятся на термостабильные аллергены, стойкие к нагреванию и воздействию ферментов желудочно кишечного тракта, и лабильные, легко разрушающиеся при тепловой обработке и под воздействием ферментов.

Термостабильные аллергены часто вызывают тяжелую реакцию (например, анафилаксию), а лабильные вызывают только локальную реакцию (например, оральный аллергический синдром — ОАС -неприятное ощущение во рту) или вообще могут не давать никакой симптоматики.

Эта информация позволит корректировать свой рацион, а не исключать продукт — аллерген полностью. Мы будем знать, на что конкретно реагирует организм, и избегать именно то, что ему так не нравится или научимся это правильно готовить

Источник: http://myallergo.ru/diagnostika/razbiraem-allergochip/

Молекулярная аллергодиагностика, Анализы на аллергены – Клиника семейной и функциональной медицины FxMed

Рекомбинантный аллерген

Молекулярная аллергодиагностика — это современный подход к диагностике аллергии (анализы ан аллергены), при котором определяются уровень специфического IgE к компонентам (белковым молекулам) аллергена вместо экстрактов аллергенов. Аллергенная молекула – это высокоочищенные белки, которые можно выделить из природных источников — нативные, очищенные аллергены или получить рекомбинантно — рекомбинантные аллергены.

1) Выявить истинную сенсибилизацию и перекрестно-реактивную у полисенсибилизированных пациентов, что позволяет определить точный триггер аллергии

Перед тем, как приступать к терапии, важно установить точный триггер аллергии. Часто при проведении кожных аллергопроб (прик-тестирования) у пациента наблюдаются множественные положительные реакции на экстракты аллергенов. Это может быть связано с фактической полисенсибилизацией или моносенсибилизацией с перекрестно-реактивными реакциями.

Анализ отдельных компонентов источников аллергенов и наиболее важных паналлергенов позволяет быстро и точно определить точный триггер симптомов аллергии. Например, пациент с аллергией на пыльцу, у которого подтвержденная сенсибилизация к главному аллергену Bet v1 от пыльцы березы, вероятно, также будет реагировать на гомолог Cor a1.

0103 от пыльцы фундука или rAln q 1 от пыльцы ольхи. Более того, гомологи Bet v1 обнаружены не только в пыльце деревьев, но и в растительных продуктах питания, например, яблоки, персики, морковь, сельдерей, арахис и орехи. Таким образом, сенсибилизация к Bet v1 может быть причиной аллергической реакции с Ara h8 из арахиса или Mal d1 из яблока.

Это называется перекрестно-реактивная пищевая аллергия, связанная с пыльцой.

2) Оценить риск развития тяжелых системных реакций на пищевые аллергены и разработать точные диетические рекомендации

Белковые компоненты аллергенов, которые относятся к разным семействам вызывают симптомы различной степени тяжести. Таким

Молекула главного аллергена березы

образом, молекулярная аллергодиагностика может установить, имеет ли пациент низкий или высокий риск тяжелых системных реакций, таких как анафилактический шок.

Для пациентов с высоким риском развития опасных для жизни реакций разработать рекомендации о исключении пищевых продуктов из рациона питания, а также о принятии соответствующих мер при неотложном состоянии (анафилактическом шоке).

Например, если пациент сенсибилизирован к аллергенам из семейства профиллинов или белков PR-10, то обычно реакции на пищу являются не тяжелыми и протекают в виде орального аллергического синдрома. В то время как пациенты, которые сенсибилизированы к аллергенам, принадлежащим к семейству белков хранения, имеют высокий риск развития угрожающих жизни системных реакций.

Кроме того, семейства белков отличаются своей термостабильностью, которая играет важную роль в пищевой аллергии. Белки из семейства профиллины и белки PR10 являются термолабильными и в продуктах обычно денатурируются в процессе приготовления, что снижает их аллергенность. В то время, как белки хранения или LTP являются термостабильными и не меняют своей аллергенности в процессе приготовления.

Пыльца берёзы

3) Точно подобрать компоненты для аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ) и спрогнозировать ее эффективность

В зависимости от причины аллергии, ее можно лечить, неспецифическими методами (элиминация аллергена и профилактические мероприятия), симптоматически или с помощью аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ).

SIT имеет большие шансы на успех, когда пациент в первую очередь сенсибилизирован к основным компонентам экстракта аллергенов. Только с помощью молекулярной диагностики аллергии (анализы на аллергены) можно получить эту подробную информацию.

Затем точно подобрать компоненты АСИТ и повысить качество жизни пациента, исключив все профилактические и элиминационные мероприятия. Пациент живет обычной жизнью без симптомов аллергии.

На рынке доступны разные тест-анализаторы для молекулярной диагностики аллергии, как единичные, так и микрочиповые многокомпонентные

ALEX – лучший метод диагностики аллергии. ALEX – это многокомпонентный тест, который позволяет одновременно определить уровень антител к аллергенным молекулам и экстрактам аллергенов в крови, и получить паспорт сенсибилизации для каждого пациента.

Для компонентной диагностики доступно 160 экстрактов аллергенов и 122 аллергенных молекулы.

Они включают в себя белковые молекулы из группы белков переносчиков липидов LTP и PR-10 с ограниченной перекрестной реактивностью, а также абсолютно новые маркеры, как растительного, так и животного происхождения (например, Acarus siro, Malassezia sympodialis, Anisakis simplex).

Анализ на аллергены ALEX можно проводить во время цветения и в острый период заболевания! На результат анализа не влияет прием антигистаминных препаратов, гормональных препаратов, антилейкотриеновых препаратов, топических стероидов и других лекарственных средств!

Источник: https://fxmed.com.ua/chto-takoe-molekuljarnaja-diagnostika-allergii-i-kogda-ee-primenjat/

Рекомбинантный аллерген – АнтиАлергик

Рекомбинантный аллерген

Ресурсы сайта (1449 работ)

ФС.3.3.1.0001.15 Аллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Аллерген туберкулезный                               ФС.3.3.1.0001.15

рекомбинантный в                                                Взамен ГФ Х, ст. 706,

стандартном разведении                                ФС 42-19ВС-86

Настоящая фармакопейная статья распространяется на аллерген туберкулезный рекомбинантный, который представляет собой гибридный белок с молекулярной массой около 27 кДа, состоящий из 2 антигенов CFP10-ESAT6, продуцируемый генетически модифицированной культурой Еscherichia соli BL21(DE3)/pCFP-ESAT.

Аллерген туберкулезный рекомбинантный предназначен для диагностики туберкулеза.

Новые возможности с рекомбинантными аллергенами › Клиника – Форпост

В составе специфических аллергенов, сейчас возможно также выделить наиболее активные белковые компоненты, которые вызывают выработку IgE антител и аллергические симптомы.

Например, проводя обычный тест на аллергию, выявлена сенсибилизация к аллергену пыльцы березы. Но этот аллерген включает несколько аллергенных компонентов. Это и есть рекомбинантные аллергены.

Рекомбинантные аллергены – это аллергенные молекулы, полученные методом генной инженерии, первоначально выделенные из аллергенного экстракта.

Большинство существующих рекомбинантных аллергенов экспрессированы в клетке Esherichia coli, и по своим структурным и иммунологическим свойствам полностью соответствуют натуральным протеинам. Другие высокотехнологические системы основаны на воспроизведении

рекомбинантных аллергенов в дрожжевой, бактериальной или инсектной клетке.

Рекомбинантные аллергены обладают тем же специфичным свойством к индукции IgE-антител, что и компоненты натуральных экстрактов и обычно демонстрируют высокую чувствительность и специфичность в тестах in vitro и in vivo.

Сегодня множество аллергенных молекул из различных натуральных источников аллергенов могут быть клонированы, секвинированы и экспрессированы как рекомбинантные аллергены.

Использование рекомбинантных аллергенов позволяет выявить сенсибилизацию к компонентам ( специфичным белкам).

Таким образом, использование рекомбинантных аллергенов – это важная информация о триггерных стимулах на молекулярном уровне. Исследование реактивности к рекомбинантным аллергенам дает возможность изучать более сложные популяционные явления, такие как географические различия в IgE-опосредованной чувствительности и перекрестные реакции между различными аллергенами.

• В случае, когда в натуральном экстракте содержание аллергенных компонентов низкое, дополнение основного рекомбинантного белка к экстракту улучшает клиническую чувствительность и количественную постановку теста.

• Рекомбинантные аллергены могут быть объединены для формирования композиции, содержащей оптимальное соотношение основных аллергенных компонентов из натурального экстракта, и исключающих компоненты, имеющие малое диагностическое значение. Это открывает интересные возможности для улучшения качества тестов в будущем.

• Использование тестов на отдельные аллергенные компоненты дополняют традиционные тесты на IgE антитела с целью получения более детальной информации. Возможность исследовать чувствительность к отдельным компонентам аллергена может пролить свет на необъяснимые явления.

• Тестирование с отдельными компонентами используется для более подробного исследования и объяснения аллергической реактивности, а также для определения перекрестной реактивности к различным аллергенам.

Что такое перекрестная аллергия и для чего это нужно

Для пациентов, у которых появляются симптомы после употребления в пищу яблока или других фруктов, обычный тест, основанный на применении экстракта, будет выявлять причиннозначимый аллерген, такой как яблоко, персик, груша. Однако истинной причиной может быть сенсибилизация к пыльце деревьев или трав, перекрестная реакция между компонентами аллергенов, имеющими одинаковую структуру и представленными в пыльце растений и пищевых белках.

Тесты на отдельные аллергеные компоненты могут быть использованы для получения большей информации о причине сенсибилизации на молекулярном уровне, например, к молекулам пыльцы, LTPs или профилинам, и делает возможным сделать выводы врачам о клинических проявлениях.

Так как у пациентов, реагирующих на пыльцу, симптомы проявляются только в определенный сезон, то симптоматическое лечение в период цветения может быть эффективно, а для пациентов чувствительных к LTP еще обязательно необходима элиминационная диета.

К тому же у этих пациентов, вероятно, разовьются более тяжелые симптомы.

Вот объяснение почему ребенок у которого была аллергия к латексной соске со временем дал реакцию на банан или авокадо – наличие рекомбинатных аллергенов ( перекрестная чувствительность, один и тот же по структуре белок аллерген)

Более точный ответ нужна ли СИТ

Рекомбинантные аллергены дают возможность высокоспецифической диагностики, с помощью которой возможно определить объективные критерии для назначения специфической иммунотерапии (СИТ).

Тесты с рекомбинантными аллергенами открывают новые возможности прогнозирования, будет ли назначение СИТ эффективным или нет, и назначения адекватной терапии.

Если аллергические реакции у пациента обусловлены сенсибилизацией к основному компоненту аллергена.

С высокой степенью вероятности можно прогнозировать высокий терапевтический эффект от СИТ с экстрактом пыльцы березы, который будет содержать высокую концентрацию этого компонента.

Источник: https://continentnn.ru/lechenie/rekombinantnyj-allergen.html

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.